芦荟组织培养快速繁殖技术

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芦荟是百合科芦荟属多年生常绿多肉质草本植物。近年来,由于芦荟化学及药理学研究的深入,巳形成了一股世界性的芦荟保健热。芦荟的栽培产业也已开始在我国兴起,但由于芦荟不能自花授粉结实,因此,用种子繁殖非常困难。目前的繁殖方法主要是分株和分蘖,但难以快速、大量地繁殖种苗,这也是当前芦荟种苗昂贵的重要原因之一。本文介绍一种对芦荟茎尖进行组织培养快速繁殖试管苗的技术,利用这项技术可在短期内繁殖上百万株的种苗,具有成本低,效益高的特点。

 一、材料和培养基

l0-l5cm高的芦荟幼苗;愈伤组织诱导培养基为MS+(1一6mg/L)BA+(0.1一0.5mg/L)NAA;分化培养基为MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA;生根培养基为MS+(0.1一0.5mg/L)IBA+(2一5mg/L)PP33。

二、繁殖方法

(一)愈伤组织培养将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次,剪去叶片和大部分茎段,取茎尖部分,再冲洗1-2次,淋干。在超净台上,先用75%的乙醇将茎尖浸泡30-60s,再用升汞浸5-l0min,最后用无菌水冲洗数次。用解剖刀取出包括茎尖生长点的组织切块,接种到愈伤组织诱导培养基上。培养条件为:每天光照10-12h,光照度为1000一2000Lx,温度(25士)2℃。大约15-25d后,试管中接种的外植体就可以膨大,形成愈伤组织。愈伤组织的形成标志着接种的外植体的生长状态已脱离分化状态,开始重新恢复分生能力。愈伤组织形成1周后,就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。

(二)继代培养将愈伤组织在无菌条件下,从试管中取出,用镊子和解剖刀剔除附着在愈伤块上的培养基,并用无茵水反复清洗数次,直至愈伤块上无残留培养基为止。用解剖刀将愈伤块切成数个小块,再接种到装有愈伤组织诱导培养基的三角瓶中,在与诱导愈伤组织相同的培养条件下继续培养。几天后,三角瓶中的小愈伤块即可逐渐长大,这一过程称作继代培养,可反复操作。通过愈伤组织的继代培养,原来接种的1个芦荟茎尖组织可繁殖出大量的新接种材料来,用于分化培养。

(三)分化培养将愈伤组织在无菌条件下,从试管或三角瓶中取出,用无菌水洗净,切成小接种块,接种到装有分化培养基的三角瓶中,分化培养的条件同愈伤组织培养。大约30-50d后,愈伤组织就可分化出芽,并继续长出小叶片。当分化出的幼苗长到一定高度或分化出一定数量后,将这些小幼苗在无菌条件下取出,进行生根培养或重新诱导分化。

(四)生根培养当三角瓶中的幼苗叶片长到3cm左右时,将幼苗在无菌条件下取出,放入装有生根培养基的三角瓶中培养,培养条件同分化培养。大约半个月后,幼苗即可生根。

(五)炼苗当幼苗的根长到一定长度,幼苗形体已显健壮时。将幼苗取出,在清水中洗除附着在根上的培养基(注意:一定要严格洗净,否则会烂根)。将洗净的幼苗排好,用清水喷湿,在15-25℃、湿度60%-80%的条件下炼苗24h,也可视情况缩短为l2h。

(六)移栽炼苗后,将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化苗圃中驯化,每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水,大约15-20d后,视幼苗长势,即可移栽到苗圃中。

三、注意事项

1、配制培养基时,要严格精确地称取各种化学试剂。培养基中的蔗糖可用市售白糖来替代,从而降低成本。高压灭菌条件为120℃,1.5kg/cm2,3Omin。每次接种前都要对接种室进行甲醛熏蒸和紫外线灭菌。

2、在培养中,如果出现杂菌污染,应立即将该污染试管或三角瓶中的培养物倒掉并将试管或三角瓶洗净,烘干备用。对于愈伤组织或试管苗长势良好,仅有局部杂菌污染的试管或三角瓶,也可在无菌条件下,将愈伤组织或试管苗取出,重新放入装有相应培养基的试管或三角瓶中,继续培养。

3、炼苗后,也可先将试管苗浸泡在溶解有生根粉的清水中1-2h,再移栽到驯化苗圃中。在驯化过程中,除要注意环境湿度、温度和光照外,还要注意防止各种病虫害的发生。芦荟的虫害主要是红蜘蛛和蚜虫,可喷施40%的氧化乐果乳油1200倍液防治。芦荟的病害主要是黑斑病,可喷施50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液防治。

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